POCT的基本原理是把傳統(tǒng)分析儀器微型化，操作方法簡(jiǎn)單化，使之成為便攜式和手掌式的設(shè)備。應(yīng)用實(shí)時(shí)快速熒光定量PCR技術(shù)及核酸快速釋放技術(shù)，通過擴(kuò)增產(chǎn)物的熒光信號(hào)的變化實(shí)現(xiàn)對(duì)病毒核酸的監(jiān)測(cè)。同時(shí)，還可以實(shí)現(xiàn)在一個(gè)反應(yīng)體系下檢測(cè)多種病原體，方便快捷，在臨床醫(yī)療、健康管理、軍事管理、生物應(yīng)急、動(dòng)物衛(wèi)生等場(chǎng)合均有廣泛的應(yīng)用。POCT技術(shù)平臺(tái)在分子診斷的基礎(chǔ)上融入POCT快速的優(yōu)勢(shì)，進(jìn)行呼吸道系列產(chǎn)品的研發(fā)工作。
POCT 產(chǎn)品具有三個(gè)方面的鮮明特色：
1. 檢測(cè)時(shí)間：POCT產(chǎn)品縮短了從樣本采集、檢測(cè)到結(jié)果報(bào)告的檢測(cè)周期；
2. 檢測(cè)空間：POCT 屬于在被檢測(cè)對(duì)象身邊的檢測(cè)；
3. 檢測(cè)的操作者：POCT 的操作者可以是非專業(yè)檢驗(yàn)師，甚至是被檢測(cè)對(duì)象本人。
PCR-反向點(diǎn)雜交法技術(shù)是采用PCR體外擴(kuò)增和DNA反向點(diǎn)雜交相結(jié)合的基因檢測(cè)技術(shù)。該技術(shù)采用生物素標(biāo)記的引物進(jìn)行靶序列的擴(kuò)增，將擴(kuò)增產(chǎn)物同固定在膜條上的特異性探針進(jìn)行雜交，一次雜交反應(yīng)可同時(shí)檢測(cè)多種靶序列。廣泛應(yīng)用于病原體檢測(cè)、基因突變檢測(cè)、基因分型及遺傳多態(tài)性檢測(cè)等方面，具有潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值。其技術(shù)原理如下圖所示。反向點(diǎn)雜交法技術(shù)平臺(tái)開發(fā)的人乳頭瘤病毒基因分型（25型）檢測(cè)試劑盒（PCR-反向點(diǎn)雜交法）可以針對(duì)女性宮頸脫落上皮細(xì)胞樣本中的25種HPV進(jìn)行檢測(cè)和分型。
技術(shù)特點(diǎn)：
該技術(shù)具有快速、簡(jiǎn)便、高靈敏度的特點(diǎn)，同一反應(yīng)管可以檢測(cè)多種靶標(biāo)片段，在病原體檢測(cè)、基因突變檢測(cè)、基因分型及遺傳多態(tài)性檢測(cè)中具有顯著的優(yōu)勢(shì)。
特異性高。擴(kuò)增產(chǎn)物同探針結(jié)合具有高特異性。
適用范圍廣。廣泛應(yīng)用于病原體檢測(cè)、基因突變檢測(cè)、基因分型及遺傳多態(tài)性等多個(gè)領(lǐng)域，具有潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值。
操作簡(jiǎn)單。反應(yīng)液為預(yù)分裝試劑，直接加入模板就可進(jìn)行擴(kuò)增。
基因甲基化是遺傳表觀學(xué)的重要組成部分。甲基化修飾異常是腫瘤發(fā)生過程中的早期事件，是細(xì)胞的遺傳本質(zhì)和外界環(huán)境影響共同作用的結(jié)果?；虻膯?dòng)子區(qū)域發(fā)生甲基化修飾后，往往使得該基因的表達(dá)下調(diào)，隨之影響了細(xì)胞內(nèi)一系列的分子事件，最終導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生癌變，圖1為宮頸癌變過程。利用分子診斷方法對(duì)腫瘤DNA甲基化程度進(jìn)行測(cè)定，可以輔助診斷腫瘤及判斷預(yù)后，對(duì)腫瘤的篩查和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估、早期診斷、預(yù)后診斷及治療檢測(cè)具有重要的意義。
金迪安分子研發(fā)團(tuán)隊(duì)針對(duì)已有的HPV和TCT產(chǎn)線布局，利用新建的甲基化技術(shù)平臺(tái)開發(fā)宮頸癌甲基化檢測(cè)產(chǎn)品。圖2為金迪安團(tuán)隊(duì)開發(fā)的宮頸癌甲基化檢測(cè)產(chǎn)品實(shí)驗(yàn)操作流程為：標(biāo)本采集/暫存→脫落細(xì)胞gDNA提取→DNA濃度檢測(cè)→亞硫酸鹽化學(xué)轉(zhuǎn)化→bisDNA純化→熒光PCR反應(yīng)→結(jié)果判讀。
探針熔解曲線技術(shù)是通過實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)溫度變化過程中探針的熒光強(qiáng)度變化情況，從而得到熒光強(qiáng)度隨溫度變化的曲線，然后通過對(duì)熒光強(qiáng)度隨溫度的變化進(jìn)行轉(zhuǎn)換，得到直觀的探針熔解曲線峰圖。熒光探針與不同靶序列雜交，形成的雙鏈雜交體的穩(wěn)定性也不同，故具有不同的Tm值。其技術(shù)流程如下圖1所示。探針熔解曲線技術(shù)平臺(tái)針對(duì)藥物代謝基因、人類白細(xì)胞抗原基因以及HPV感染進(jìn)行檢測(cè)，在SNP檢測(cè)、基因多態(tài)性分型以及HPV高低危分型等方面有廣泛應(yīng)用。
技術(shù)特點(diǎn)：
檢測(cè)通量高。同一反應(yīng)管可檢測(cè)十幾種甚至更多靶標(biāo)片段，在病原體分型檢測(cè)、多重耐藥基因檢測(cè)、用藥指導(dǎo)基因篩查等方面具有顯著優(yōu)勢(shì)。
對(duì)SNP位點(diǎn)識(shí)別特異性高?？梢苑直娉霭行蛄泻蜔晒馓结樒ヅ涑潭?對(duì)SNP位點(diǎn)就有高的檢測(cè)特異性。
適用范圍廣。可在在腫瘤、遺傳和微生物等多個(gè)領(lǐng)域中進(jìn)行應(yīng)用。
成本低廉。在檢測(cè)相同數(shù)量靶序列的情況下熒光探針熔解曲線技術(shù)所需的熒光探針數(shù)量遠(yuǎn)少于傳統(tǒng)實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)。
